Հիմնական տարբերություն. Blunt vs Sticky End Ligation

Սահմանափակման էնդոնուկլեազները հատուկ ֆերմենտներ են, որոնք կտրում են երկչողմանի ԴՆԹ-ն (dsDNA): Դրանք նաև մոլեկուլային կենսաբանության մեջ հայտնի են որպես մոլեկուլային մկրատ: Սահմանափակումային ֆերմենտները ունակ են ճանաչել dsDNA- ի հատուկ կարճ հաջորդականությունները, որոնք հայտնի են որպես ճանաչման վայրեր և կրկնակի շղթաներ բացելու համար քողարկում են ֆոսֆոդիեստերի և ջրածնի կապերը: Այս ֆերմենտների կողմից պեղման արդյունքում ԴՆԹ բեկորները արտադրվում են տարբեր տեսակի ծայրերով, ինչպիսիք են կպչուն ծայրերը և բութ ծայրերը: ԴՆԹ-ի լիգազը մոլեկուլային կենսաբանության մեջ օգտագործվող ֆերմենտ է ՝ ԴՆԹ-ի երկու հարակից հատվածներին միանալու համար ՝ նոր պարտատոմսեր ձևավորելով: Քայլը հայտնի է որպես լիգինգ, և ըստ ԴՆԹ վերջի տիպի կաղապարված տիպի, դրանք կարելի է անվանել որպես բութ վերջի լիգինգ և կպչուն վերջի ligation: Կտրուկ և կպչուն վերջավոր կապանքների միջև հիմնական տարբերությունն այն է, որ բութ վերջի կապումը տեղի է ունենում ԴՆԹ բեկորների միջև, որոնք պարունակում են երկու բութ ավարտ, մինչդեռ կպչուն ծայրամասային կապումը տեղի է ունենում 5-ից 3-րդ ծածկույթների միջև: Համեմատել բութ վերջի լիգինգի հետ, կպչուն վերջի կապանքն ավելի արդյունավետ և կայուն է:

ԲՈՎԱՆԴԱԿՈՒԹՅՈՒՆ 1. ակնարկ և հիմնական տարբերություն 2. Ինչն է բութ վերջի քողարկում 3. Ինչն է կպչուն վերջավոր քողարկում 4. կողք կողքի համեմատություն - Blunt vs Sticky End Ligation 5. Ամփոփում

Ինչ է բութ վերջի ծայրամասը:

Որոշ սահմանափակող էնդոնուկլեոզներ կարող են կտրել ԴՆԹ-ն հակառակ հիմունքներով և առաջացնել անթերի վերջնական ԴՆԹ բեկորներ: Այս ֆերմենտները հայտնի են որպես բութ վերջի կտրիչներ. նրանք ուղիղ կտրվում են դեպի սահմանափակման վայրի կեսը ՝ առանց թողնելով մեկ տողերով գերհագեցած հիմքեր: Բութ ծայրերը նաև հայտնի են որպես ոչ գերտաքացման վերջույթներ, քանի որ ծայրերում նրանք չունեն 3 'և 5' վերափոխվող հիմքեր: Երկու շերտերն էլ ավարտվում են բազային զույգերից ՝ բութ ծայրերում: Վերջնական կտրատող ֆերմենտները EcoRV HaeIII, AluI և SmaI են:

Blunt end ligation- ը ներգրավված է երկու բութ ծայրերի միջև: Դա դուրս պրծած հիմքերի կապում չէ: Այս կաղապարն ավելի քիչ արդյունավետ է, քան կպչուն վերջի սալիկապատումը: Այնուամենայնիվ, որոշ դեպքերում, բութ վերջի կապանքն ավելի ձեռնտու է, քան կպչուն վերջի կապելը, հատկապես PCR- ի արտադրանքը կապելիս: PCR արտադրանքները միշտ արտադրվում են բութ ծայրերով: Blunt end ligation- ը չի պահանջում ԴՆԹ-ի մեջ լրացնող ծայրամասեր լիգինգի համար:

Ինչ է կպչուն վերջի լիգան:

Որոշ սահմանափակող էնդոնուկլեոզներ ի վիճակի են կրճատել dsDNA- ն ՝ վերջում թողնելով մեկ տողային ԴՆԹ-ի գերհագեցած կտոր: Այս ծայրերը հայտնի են որպես կպչուն կամ գերհագեցած ծայրեր: Կպչուն վերջավոր կապումը տեղի է ունենում ԴՆԹ-ի երկու բեկորների միջև, որոնք պարունակում են համընկնող հատումներ, քանի որ կպչուն ծայրերը տիրապետում են չվճարված հիմքերով և պարտատոմսեր կազմելու համար պահանջում են լրացնող հիմքեր: Հետևաբար, անհրաժեշտ է օգտագործել նույն սահմանափակող ֆերմենտ ՝ ԴՆԹ-ի երկու աղբյուրների համար ՝ համապատասխանեցնող կապող բեկորներ ստեղծելու համար:

Կպչուն վերջի կապանքն ավելի արդյունավետ է և հաճախ ցանկալի է կլոնավորման գործընթացներում: Կան մի քանի սահմանափակող ֆերմենտներ, որոնք արտադրում են կպչուն ծայրեր: Դրանք EcoRI, BamHI, HindIII և այլն:

Ո՞րն է տարբերությունը Blunt- ի և Sticky End Ligation- ի միջև:

Ամփոփում - Blunt vs Sticky End Ligation- ը

Սահմանափակումային էնդոնուկլեաները կարողանում են մաքրել dsDNA- ն և տարբեր ծայրերով ԴՆԹ բեկորներ արտադրել: Նրանք ճանաչում են հատուկ հաջորդականություններ և սահմանափակում են ԴՆԹ-ն ՝ ստեղծելով կպչուն և բութ ծայրեր: Կպչուն ծայրերը բեկորների վերջում ունեն չվճարված հիմքեր: Բութ ծայրերը ստեղծվում են ուղիղ ճեղքման պատճառով, և ծայրերում դրանք ունեն բազային զույգեր: Կպչուն վերջի կապանքն անհրաժեշտ է երկու լրացնող մեկ տող ԴՆԹ կտոր: Blunt end ligation- ը տեղի է ունենում ցանկացած երկու բութ վերջի հատվածների միջև: Սա տարբերությունն է բութ և կպչուն կապանքի միջև:

Հղումներ. 1. Ռոբերտս, Ռիչարդ J.. «Ինչպե՞ս են սահմանափակման ֆերմենտները դարձել մոլեկուլային կենսաբանության աշխատող»: Գիտությունների ազգային ակադեմիայի գիտական ​​տեղեկագիր: Ազգային ակադեմիայի գիտություններ, երկրորդ վեբ: 12 Ապրիլ 2017 2. Adnan, Amna. Սահմանափակումային ֆերմենտների օգտագործումը կենսատեխնոլոգիայում: Np, nd Վեբ: 12 ապրիլի 2017 թ

Պատկեր. Քաղաքավարություն. 1. «EcoRV- ի սահմանափակման site.rsh» հեղինակ ՝ Ռամին Հերաթի - ստեղծվել է Inkscape- ով (հանրային տիրույթ) ՝ Wikimedia– ի միջոցով: «Սահմանափակման ֆերմենտ Eco RI» Tinastella - սեփական աշխատանք (հանրային տիրույթ) ՝ Wikimedia– ի միջոցով